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固相萃取技術(shù)在進(jìn)行時要注意哪些事項(xiàng)

更新時間:2023-01-17      點(diǎn)擊次數(shù):1324
  固相萃取是利用固體吸附劑將樣品中的目標(biāo)化合物吸附,與樣品的基體和干擾化合物分離,然后再用洗脫液洗脫,達(dá)到分離和和富集的目的。先使樣品通過一裝有吸附劑(固相)小柱,保留其中某些組分,再選用適當(dāng)?shù)娜軇_洗雜質(zhì),然后用少量溶劑迅速洗脫,從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。
  應(yīng)用固相萃取技術(shù)時的注意事項(xiàng)
  1. 盡量慢
  我們在用固相萃取時,面臨的一個問題就是:液體應(yīng)該以什么速率過柱流出,我的經(jīng)驗(yàn)是,要想效果好,就要慢,盡量慢。
  對于固相萃取柱中的填料,我們?nèi)绻植糠糯蟮乜矗軌蚩吹狡鋵?shí)它們是有很多的空隙,液體流通的渠道很多,如果流得快,相當(dāng)比例的待測組分還來不及與填料充分作用就地從通道流失;所以要慢,給它們一個充分作用的機(jī)會。
  如何慢呢?一個竅門就是不要用配合抽氣機(jī)使用的所謂固相萃取器,而采用再普通不過的重力法。利用重力的作用使液體向下流出。在實(shí)驗(yàn)速度上,重力法遠(yuǎn)不如吸力法,但是在實(shí)驗(yàn)效果方面,重力法遠(yuǎn)比吸力法優(yōu)勝,用吸力法只能得到譜帶吸附,用重力法卻能得到柱頭吸附,在速度和效果兩者的平衡中,我們還是傾向于優(yōu)先保證好的效果。
  2. 盡量少
  在固相萃取條件選擇上,有人為了提高提取效率,盡量多加液體,或選擇填料量大的小柱,我覺得大可不必如此。尤其在用重力法時,由于效率高,很多情況下是柱頭吸附,并不是所有的填料都在起作用,填料多了不僅液體流出速度會更慢,而且在洗脫時的擴(kuò)散會很明顯。
  因此建議,夠用就行,在能保證效率時,填料盡量少,加液也不宜多。
  3. 實(shí)驗(yàn)條件不宜過分細(xì)化
  固相萃取從原理上是色譜分離,但是在操作時最好只把它作為吸附萃取劑使用,由于填料性質(zhì)、松緊常有差異,因此在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中不必因?yàn)樽非笮Ч淖罴鸦O(shè)計出很復(fù)雜的洗脫程序。
  在建立條件中,我們應(yīng)該盡量多利用現(xiàn)成的資料,盡快地建立起體系,同時要對操作過于復(fù)雜的步驟保持警惕性,在實(shí)驗(yàn)效果,實(shí)驗(yàn)速率和易操作性三者中取得平衡點(diǎn)。
  4. 只用一次
  固相萃取柱最好只用一次。因?yàn)閺膰?yán)格的意義上來說,很多物質(zhì)的吸附是不可逆的,一次吸附,無法洗脫,影響著下一次吸附,雖然有人做過重復(fù)利用的實(shí)驗(yàn),但是總體來說為了節(jié)省一點(diǎn)經(jīng)費(fèi)而大大增加了結(jié)果的不可靠性和不確定性,是很不合算的行為。
  因此建議,只用一次。如果想節(jié)省經(jīng)費(fèi)可以從減少填料量和使用小容積管入手,盡量用堆疊接頭和延長管。
  5. 慎用固相萃取器
  所有的供應(yīng)商都會在推薦固相萃取柱的同時,推薦固相萃取器,簡單的固相萃取器也要幾千,如果貼個進(jìn)口商標(biāo)價格更要加幾倍,這樣的價格還不包括抽氣機(jī)。但是這樣的配置就是再加上調(diào)速開關(guān),也很難得到好的結(jié)果,主要問題就是把小柱的不平行性放大了。
  6. 不可忽視傳統(tǒng)的液體萃取
  有些人在初次接觸固相萃取時,總覺得它能取代液體萃取,實(shí)際上就象毛細(xì)管電泳無法取代液相色譜一樣。固相萃取在某些場合比液體萃取合適,但是在更多情況下,還是傳統(tǒng)的液體萃取更可靠更合適。這一點(diǎn)從目前實(shí)驗(yàn)技術(shù)的實(shí)際發(fā)展可以得到印證。
  關(guān)于液固萃取,我們不要僅僅把它看作是一個提取過程,從另一個角度來看,它還是一個凈化過程,是把固形干擾物排除凈化的過程。理解這一點(diǎn),有助于我們優(yōu)化選擇實(shí)驗(yàn)方法。
  7. 實(shí)用性是實(shí)驗(yàn)設(shè)計成功與否的最終準(zhǔn)繩
  在設(shè)計一個實(shí)驗(yàn)時,開始要考慮到其技術(shù)上是否先進(jìn)。而在實(shí)際運(yùn)用中,最終決定這個方法是否可行,是否能夠存在的關(guān)鍵是實(shí)用性。一個實(shí)驗(yàn)方法不僅要解決問題,而且能夠在人力,物力,財力三方面達(dá)到平衡,且滿足可持續(xù)、可重復(fù)操作的要求。

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